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盐溶液直接在280nm下测UV为什么不稳定?

文章出处:未知责任编辑:三昆科技人气:发表时间:2018-04-10 08:18

问题描述: 表示紫外分光酣籂丰饺莶祭奉熄斧陇光度计在波长为280nm处的吸光度值,由于在280nm处,蛋白质有一个明显的吸收峰,因此在此波长下蛋白质的浓度与吸光度值呈线性关系,可以定量表示蛋白质在溶液中的含量

回答(1). 紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的: 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法. 原理: 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值 (OD260/OD280),估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰. 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法. 试剂与仪器: 提取的质粒DNA,紫外分光光度仪. 操作步骤: 1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零. 2) 取质粒DNA样品2μl,用水稀释100倍,转入分光光度计的石英比色杯中. 3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl,则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,则样品浓度即为1μg/μl. 4) 若OD260/OD280大于1.8,说明仍有RNA,可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1姬俯灌谎弑荷鬼捅邯拉.8,说 明样品中含有蛋白质或酚,应再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀纯化DNA.

回答(2). 蛋白质组成氨基酸中的苯丙酮酸、酪氨酸和色氨酸含有苯环共轭双键,具有光吸收能力。苯丙氨酸的最大吸收护浮篙簧蕻毫戈桐恭昆波长在259,酪氨酸最大吸收波长在278,色氨酸最大吸收波长在279。一般采用紫外分光光度计在在280nm处测量。

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